病理組織固定那些事兒

高醫(yī) · 病理科

Why病理組織為什么要固定 病理活體組織固定是病理質(zhì)控流程的最關(guān)鍵步驟，是病理制片的第一步。有效的固定才能制作出優(yōu)質(zhì)切片，為病理診斷提供基礎(chǔ)依據(jù)。如果組織固定不佳，造成組織變質(zhì)腐爛、抗原丟失，將嚴(yán)重影響切片質(zhì)量，也將導(dǎo)致診斷困難或無法診斷，并嚴(yán)重影響到后續(xù)免疫組化及基因檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。 When標(biāo)本從離體到固定的時間 根據(jù)指南及共識，推薦送檢手術(shù)標(biāo)本在離體后0.5-1h及時固定，其中胃腸等空腔臟器因含蛋白酶及消化液等，建議在離體0.5h以內(nèi)固定。 How病理科標(biāo)本的規(guī)范化固定的具體要求 組織固定這一步是不可逆的，也是不可補(bǔ)救的，故此組織標(biāo)本離體后，手術(shù)醫(yī)生需配合完成標(biāo)本的質(zhì)控管理，按以下要求處理標(biāo)本： 一、規(guī)范 規(guī)范地剖開標(biāo)本。大標(biāo)本應(yīng)在不妨礙病理檢查情況下切開固定。例如，有腔器官或腫物，要按其自然狀態(tài)剪開，暴露黏膜面或內(nèi)表面的病變；乳腺、肝、脾、腎等實(shí)質(zhì)器官或結(jié)節(jié)狀大腫物，沿其長軸每間隔1.5cm縱向平行剖開，切成書頁狀。 二、及時 標(biāo)本離體后30分鐘內(nèi)必須用中性福爾馬林固定液進(jìn)行固定。? 三、合適的固定液 常規(guī)標(biāo)本用10%中性緩沖福爾馬林液固定。 四、足量 固定液的量約為標(biāo)本體積的5-10倍。 五、足夠的固定時間 小標(biāo)本的固定時間為4～6h，大標(biāo)本為18～24h或更久。 六、特殊標(biāo)本特殊固定 特殊標(biāo)本要按指定要求進(jìn)行處理。例如，睪丸穿刺標(biāo)本要采用Bouin液固定；術(shù)中冰凍送檢的標(biāo)本則不需要固定，離體后用干紗布包裹，立即新鮮送檢。 手術(shù)標(biāo)本規(guī)范固定的合格標(biāo)準(zhǔn)包括三個方面： ①離體后30 min～1 h內(nèi)固定； ②標(biāo)本按照作業(yè)指導(dǎo)書的要求規(guī)范切開； ③固定液充足。以上三條同時達(dá)標(biāo)，評估為“合格”，有任何一條不達(dá)標(biāo)，即評估為“不合格”。 什么是甲醛？ 甲醛是一種常見的揮發(fā)性試劑，又稱為福爾馬林，10%濃度的中性緩沖液是組織處理過程中最常用的固定劑，主要用于保存和固定各種組織生物樣本。甲醛在病理科的使用量非常大，尤其是在預(yù)處理、取材、脫水固定等步驟。 性狀與成分: 甲醛為無色澄明液體，有刺激性特臭；10%中性福爾馬林固定液主要由去離子水、福爾馬林、磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉成份組成。 原理與用途: 本品為醛類固定液，是一種交聯(lián)性組織固定劑，主要通過使蛋白質(zhì)分子發(fā)生交聯(lián)而產(chǎn)生固定作用，能使細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)盡量保持其生活狀態(tài)時的結(jié)構(gòu)和位置。本品采用磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉調(diào)節(jié)其pH值至中性，能最大限度地保護(hù)組織抗原。主要用于組織標(biāo)本的保存、固定和防腐。 適用范圍: 適用于人體、動物組織標(biāo)本的固定。 固定液如何配置: 10%中性緩沖福爾馬林： 甲醛 100ml 磷酸二氫鈉 4g 磷酸氫二鈉6.5g 蒸餾水 900ml 為什么首選10%中性福爾馬林固定液？ 中性緩沖福爾馬林滲透力強(qiáng)、組織收縮小，能使大多數(shù)抗原物質(zhì)保存較好，提高免疫組織化學(xué)檢測的陽性率，因此推薦作為首選固定液。 不固定病理標(biāo)本會有什么后果？ 1、固定是病理制片過程中最重要的一步，因?yàn)檫@是不可逆的，也就是無法補(bǔ)救的。組織只有經(jīng)過固定，才能完成隨后的一系列制作，直至切片的最終完成。 2、如果組織固定不佳，造成組織腐爛、抗原失活，將影響切片質(zhì)量，也將導(dǎo)致診斷困難或無法診斷，甚至影響免疫組化及基因檢測結(jié)果準(zhǔn)確性。因此及時、剖開、足量固定液的固定非常重要。 3、固定不佳還會造成細(xì)胞溶解破壞，組織扭曲變形；在室溫下極易使細(xì)菌迅速繁殖而腐敗，組織結(jié)構(gòu)被破壞，不利于形態(tài)學(xué)的診斷。 4、會導(dǎo)致標(biāo)本自溶、腐敗、干涸等，從而影響病理診斷的準(zhǔn)確性。精準(zhǔn)的病理診斷是實(shí)現(xiàn)精準(zhǔn)醫(yī)療的關(guān)鍵步驟，而病理組織固定是病理診斷的第一環(huán)節(jié)。